Preparation of recombinant lysosomal cysteine protease, cathepsin K in insect cells

Yutaka SADAKANE; Takeaki ITO; Shigeo IMANISHI; Kazuya NAKAGOMI; Yasumaru HATANAKA

アイテムタイプ

紀要論文(ELS) / Departmental Bulletin Paper

言語

英語

キーワード

昆虫細胞, 組換え酵素, 分泌型酵素, mycタグ

ページ属性

P(論文)

著者名(日)

定金豊   /  サダカネユタカ
( CiNii ID: 1000060293304 , 研究者リゾルバーID: 1000060293304 , 科研費研究者番号: 60293304 )
伊藤武朗   /  イトウタケアキ
( CiNii ID: 9000006052242 )
今西重雄   /  イマニシシゲオ
中込和哉   /  ナカゴミカズヤ
( 研究者リゾルバーID: 1000070272929 , 科研費研究者番号: 70272929 )
畑中保丸   /  ハタナカヤスマル

著者名よみ

サダカネユタカ
( CiNii ID: 1000060293304 )
イトウタケアキ
( CiNii ID: 9000006052242 )
イマニシシゲオ
ナカゴミカズヤ
ハタナカヤスマル

著者所属(日)

九州保健福祉大学薬学部薬学科
富山医科薬科大学薬学部
農業生物資源研究所昆虫生産工学研究グループ
帝京大学薬学部
富山医科薬科大学薬学部

抄録(日)

軟骨細胞に局在するシステインプロテアーゼであるカテプシンKは,骨の差異九州に関わる酵素である。カテプシンKの阻害剤は骨粗鬆症の治療薬の候補になり得る。スクリーニングや酵素の機能を調べるためには組み換えカテプシンKを大量に作成することが必要である。我々はカイコ幼虫を用いた発現系が分泌型酵素であるカテプシンKの発現に適していると考えた。C末端にmycタグを付けたカテプシンK遺伝子をカイコ用の発現ベクターに挿入し,限界希釈法で組み換えウイルスを得た。このウイルスをカイコ培養細胞に感染させてカテプシンKの発現場所を調べたところ,細胞内で発現していた。細胞外への分泌が観察されなかったのでカイコ幼虫での発現をあきらめ,培養細胞からの精製を試みた。DEAE-セファロースカラム,Mono-Sカラム,抗myc抗体アフィニティーカラムで順次精製した結果,非活性を細胞可溶性画分の約300倍に高めることに成功した。

雑誌書誌ID

AA11490417

雑誌名

九州保健福祉大学研究紀要

巻

10

ページ

201 - 207

発行年

2009-03

コンテンツ

31 研究紀要 10号定金

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