{"created":"2023-06-19T08:51:10.808197+00:00","id":1566,"links":{},"metadata":{"_buckets":{"deposit":"47fdd319-2025-4cad-ad5d-78ca54b5fd0d"},"_deposit":{"created_by":16,"id":"1566","owners":[16],"pid":{"revision_id":0,"type":"depid","value":"1566"},"status":"published"},"_oai":{"id":"oai:phoenix.repo.nii.ac.jp:00001566","sets":["148"]},"author_link":["7936","7938","7935","7939","7934","7937"],"item_3_biblio_info_7":{"attribute_name":"書誌情報","attribute_value_mlt":[{"bibliographicIssueDates":{"bibliographicIssueDate":"2023-03","bibliographicIssueDateType":"Issued"},"bibliographicIssueNumber":"№4","bibliographic_titles":[{"bibliographic_title":"Journal of Health and Welfare Investigation"},{"bibliographic_title":"Journal of Health and Welfare Investigation","bibliographic_titleLang":"en"}]}]},"item_3_text_8":{"attribute_name":"出版社","attribute_value_mlt":[{"subitem_text_value":"九州保健福祉大学"}]},"item_3_textarea_5":{"attribute_name":"抄録","attribute_value_mlt":[{"subitem_textarea_value":"メルケル細胞癌（Merkel cell carcinoma; MCC）は、孤立性の皮膚あるいは皮下腫瘍であり急速な増殖を示す悪性度の高い難治性の癌である。MCCの発癌にはメルケル細胞ポリオ―マウイルス（Merkel cell polyomavirus; MCPyV）が関わっていることが知られている。宿主細胞に組み込まれたMCPyVのLarge T遺伝子（LT）にナンセンス変異を伴う変異LTがMCCの発がんに関与していることが報告されている。本研究ではCRISPR/Cas9を用いてこの変異LT遺伝子を失活させることによるMCC細胞株の増殖抑制を試みた。LT遺伝子の転写開始点近傍を標的としたガイドRNA（sgRNA194）とCas9の混合溶液（sgRNA194/Cas9）をメルケル細胞癌細胞株(MKL-1)に導入した。sgRNA/Cas9導入細胞の標的配列を増幅し塩基配列を解析した結果、塩基の欠損等の変異が導入されていることが明らかになった。さらにsgRNA 194を導入したMKL-1細胞は、細胞増殖が低下していることが明らかになった。ウエスタンブロット法を用いてLT蛋白質の発現量を調べたところ、sgRNA194/Cas9導入後のMKL-1細胞でLT蛋白質の著明な低下が認められた。また、LT mRNAの塩基配列を決定した結果、sgRNA194/Cas9を導入したMKL-1細胞ではアレルの78％に欠損等の変異が認められたことから、sgRNA194/Cas9により変異が導入されたmRNAは蛋白質に翻訳されなかったものと推定された。一方、sgRNA194と相同性の高いヒトゲノム４領域についてオフターゲット効果を調べたが、欠損および挿入は認められなかった。本研究でCRISPR/Cas9によりMCCの発癌の原因と考えられている変異LT遺伝子に欠失などの変異を導入した結果、変異LT蛋白質の発現低下と細胞増殖が抑制されることが明らかになった。この方法を発展させることでMCCの治療法が開発される可能性が示唆された。"}]},"item_files":{"attribute_name":"ファイル情報","attribute_type":"file","attribute_value_mlt":[{"accessrole":"open_date","date":[{"dateType":"Available","dateValue":"2023-03-22"}],"displaytype":"detail","filename":"CRISPR_Cas9によるメルケル細胞癌細胞の増殖抑制.pdf","filesize":[{"value":"561.9 kB"}],"format":"application/pdf","licensetype":"license_11","mimetype":"application/pdf","url":{"label":"CRISPR/Cas9システムを用いたメルケル細胞ポリオーマプロウイルスの不活性化によるメルケル細胞癌細胞株(MKL-1)の増殖抑制","url":"https://phoenix.repo.nii.ac.jp/record/1566/files/CRISPR_Cas9によるメルケル細胞癌細胞の増殖抑制.pdf"},"version_id":"ea5361b7-f761-4f41-b881-4f5971155b93"}]},"item_keyword":{"attribute_name":"キーワード","attribute_value_mlt":[{"subitem_subject":"メルケル細胞癌","subitem_subject_scheme":"Other"},{"subitem_subject":"メルケル細胞ポリオ―マウイルス","subitem_subject_scheme":"Other"},{"subitem_subject":"LT遺伝子","subitem_subject_scheme":"Other"},{"subitem_subject":"CRISPR/Cas9","subitem_subject_scheme":"Other"},{"subitem_subject":"Merkel cell carcinoma","subitem_subject_language":"en","subitem_subject_scheme":"Other"},{"subitem_subject":"Merkel cell polyomavirus","subitem_subject_language":"en","subitem_subject_scheme":"Other"},{"subitem_subject":"LT genes","subitem_subject_language":"en","subitem_subject_scheme":"Other"},{"subitem_subject":"CRISPR/Cas9","subitem_subject_language":"en","subitem_subject_scheme":"Other"}]},"item_language":{"attribute_name":"言語","attribute_value_mlt":[{"subitem_language":"jpn"}]},"item_resource_type":{"attribute_name":"資源タイプ","attribute_value_mlt":[{"resourcetype":"departmental bulletin paper","resourceuri":"http://purl.org/coar/resource_type/c_6501"}]},"item_title":"CRISPR/Cas9システムを用いたメルケル細胞ポリオーマプロウイルスの不活化によるメルケル細胞癌細胞株（MKL-1）の増殖抑制","item_titles":{"attribute_name":"タイトル","attribute_value_mlt":[{"subitem_title":"CRISPR/Cas9システムを用いたメルケル細胞ポリオーマプロウイルスの不活化によるメルケル細胞癌細胞株（MKL-1）の増殖抑制"},{"subitem_title":"Cell growth suppression of Merkel cell carcinoma cell line (MKL-1) through the inactivation of Merkel cell polyoma provirus using CRISPR/Cas9 system","subitem_title_language":"en"}]},"item_type_id":"3","owner":"16","path":["148"],"pubdate":{"attribute_name":"公開日","attribute_value":"2023-03-22"},"publish_date":"2023-03-22","publish_status":"0","recid":"1566","relation_version_is_last":true,"title":["CRISPR/Cas9システムを用いたメルケル細胞ポリオーマプロウイルスの不活化によるメルケル細胞癌細胞株（MKL-1）の増殖抑制"],"weko_creator_id":"16","weko_shared_id":-1},"updated":"2023-06-19T08:57:11.315118+00:00"}